ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ ПОСТАНОВКИ ИФА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ БЛЮТАНГА

Аннотация

В статье представлены результаты исследований, посвященных оптимизации условий постановки отечественного набора для иммуноферментного анализа (ИФА), разработанного для выявления специфических антител к вирусу блютанга у крупного (КРС) и мелкого (МРС) рогатого скота. В работе подробно описаны ключевые этапы совершенствования методики, включая подбор условий сорбции антигена, оптимизацию концентраций реагентов, температурно-временных режимов инкубации и параметров анализа. Установлено, что оптимальная концентрация рекомбинантного антигена VP7 для сорбции составляет 5 мкг на лунку при использовании 0,05 М карбонатно-бикарбонатного буфера (КББ) и инкубации в течение 20±2 ч при температуре 5±3°C. Эти условия обеспечивают стабильное связывание антигена с антителами и высокую чувствительность анализа.

Оптимизация температурных режимов инкубации показала, что наиболее эффективным является проведение анализа при 37±1°C, что способствует повышению скорости образования иммунных комплексов и активности фермента. Использование биотинилированных моноклональных антител и стрептавидин-HRP конъюгата в сочетании с ТМБ-субстратом позволило достичь высокой специфичности и чувствительности метода. Остановка ферментативной реакции с использованием 0,5N раствора соляной кислоты подтвердила свою эффективность, обеспечивая четкую визуализацию результатов.

Разработанная тест-система демонстрирует высокий потенциал для применения в диагностике блютанга, что особенно важно для контроля и профилактики данного заболевания в условиях Казахстана. Внедрение данного набора в ветеринарную практику не только снижает зависимость от импортных аналогов, но и укрепляет диагностические возможности страны в борьбе с особо опасными инфекционными заболеваниями животных. Полученные результаты подчеркивают значимость дальнейших исследований в области совершенствования методов диагностики инфекционных заболеваний животных, что соответствует стратегическим задачам развития сельского хозяйства и обеспечения продовольственной безопасности.